TFIIF RAP 74 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405237

Panoramica

GTF2F1 codifica la subunità da 74 kDa del fattore di trascrizione IIF (TFIIF), nota anche come TFIIF RAP 74, un componente fondamentale della macchina generale di trascrizione della RNA polimerasi II. TFIIF stabilizza il complesso di pre-inizio insieme a TFIIB e TFIIE, favorisce lo “svincolo” dal promotore (promoter clearance) e modula l’allungamento della trascrizione, contribuendo al contempo a coordinare la trascrizione con l’elaborazione co-trascrizionale dell’RNA. Attraverso queste attività, GTF2F1 contribuisce al controllo globale dell’espressione genica, alla progressione del ciclo cellulare e alle risposte allo stress di replicazione o di trascrizione. Un’alterata regolazione dei fattori generali di trascrizione e della dinamica della Pol II è frequentemente associata a programmi proliferativi deregolati e a instabilità genomica, rendendo GTF2F1 un nodo utile per studi meccanicistici in biologia del cancro e nei fenotipi di malattia legati alla trascrizione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TFIIF RAP 74 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene GTF2F1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del GTF2F1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto GTF2F1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TFIIF RAP 74.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di GTF2F1 per lo studio della segnalazione di TFIIF RAP 74, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni GTF2F1 critici per la funzione di TFIIF RAP 74
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di GTF2F1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal TFIIF RAP 74 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal TFIIF RAP 74 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus GTF2F1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal TFIIF RAP 74 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR TFIIF RAP 74 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia GTF2F1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio GTF2F1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.