TFIIB Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401174-ACT

GTF2B codifica il fattore di trascrizione umano IIB (TFIIB), un componente fondamentale del complesso di pre-inizio della RNA polimerasi II che contribuisce a posizionare la Pol II sui promotori e supporta la selezione del sito di inizio durante la trascrizione basale. Facendo da ponte tra le interazioni di TBP/TFIID, TFIIF e Pol II, TFIIB contribuisce a programmi trascrizionali regolati che governano il controllo del ciclo cellulare, la differenziazione e l’espressione genica in risposta allo stress. Le alterazioni della macchina trascrizionale generale possono rimodellare i trascrittomi globali e sono state associate a stati trascrizionali oncogeni e a una capacità proliferativa modificata in diversi sistemi modello. In quanto regolatore centrale dell’inizio della trascrizione da parte della Pol II, TFIIB è comunemente studiato nell’ambito dell’architettura dei promotori, del reclutamento dei fattori di trascrizione e del controllo dell’espressione genica dipendente dalla cromatina.

TFIIB Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di GTF2B senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

TFIIB Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus GTF2B nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione GTF2B, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di TFIIB. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus GTF2B nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da TFIIB nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via TFIIB nelle cellule tumorali con espressione di GTF2B silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.