TF Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-401060-LAC

Il gene umano F3 codifica il fattore tissutale (TF), una glicoproteina transmembrana che avvia la cascata della coagulazione per via estrinseca legando il fattore VII/VIIa e promuovendo a valle la generazione di trombina e la formazione di fibrina. Oltre all’emostasi, la segnalazione dipendente da TF attraverso i recettori attivati da proteasi collega la coagulazione a vie infiammatorie e vascolari, influenzando l’attivazione endoteliale, il reclutamento dei leucociti e le risposte angiogeniche. L’espressione di F3 è regolata da citochine e segnali associati al danno ed è spesso studiata nel contesto di trombosi, aterosclerosi, coagulopatia associata alla sepsi e ipercoagulabilità associata ai tumori. Queste funzioni rendono il TF un nodo utile per analizzare il cross-talk tra coagulazione, infiammazione e rimodellamento vascolare in modelli cellulari umani.

Le particelle di attivazione lentivirale TF (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di F3 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale TF (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione F3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di TF. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo F3 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.