TET1 Plasmide Double Nickase (h): sc-400845-NIC

TET1 codifica una diossigenasi della metilcitosina che catalizza l’ossidazione graduale della 5‑metilcitosina a 5‑idrossimetilcitosina e a ulteriori derivati ossidati, sostenendo la demetilazione del DNA sia attiva sia passiva. Modulando i paesaggi di metilazione dei CpG, TET1 contribuisce alla regolazione trascrizionale, all’attività degli enhancer e alle transizioni dello stato della cromatina che orientano le decisioni sul destino cellulare e i programmi di sviluppo. TET1 si integra con reti di regolazione epigenetica che coinvolgono le DNA metiltransferasi, componenti della riparazione per escissione di basi e modificatori della cromatina, mantenendo la plasticità epigenomica a livello dell’intero genoma. Un’alterazione dell’attività di TET1 o della distribuzione di 5hmC è associata a una deregolazione dell’espressione genica osservata in oncologia, nei processi di neurosviluppo e nella differenziazione delle cellule immunitarie, rendendolo un nodo utile per studi meccanicistici dell’instabilità epigenetica.

TET1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus TET1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di TET1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di TET1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con TET1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.