Teneurin-1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-408663-ACT

Il gene umano TENM1 codifica la teneurina-1, una grande glicoproteina transmembrana di tipo II, particolarmente espressa nel sistema nervoso, che media l’adesione cellula-cellula e la segnalazione dipendente dal contatto durante la guida assonale, l’organizzazione delle sinapsi e la formazione dei circuiti neuronali. La teneurina-1 partecipa alle interazioni con la matrice extracellulare e a programmi di riconoscimento trans-sinaptico che modellano la crescita dei neuriti e la connettività, integrandosi con reti di segnalazione dello sviluppo che regolano il rimodellamento del citoscheletro e lo stato trascrizionale. Alterazioni genetiche e di espressione di TENM1 sono state associate a fenotipi di neurosviluppo e alla biologia tumorale, a sostegno della sua rilevanza negli studi sulla differenziazione neuronale, la migrazione e la comunicazione cellulare aberrante. Queste proprietà rendono TENM1 un bersaglio utile per dissezionare i pathway che governano lo sviluppo neurale e i cambiamenti, rilevanti per la malattia, nell’adesione e nella segnalazione cellulare.

Teneurin-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di TENM1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Teneurin-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus TENM1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione TENM1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Teneurin-1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus TENM1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Teneurin-1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Teneurin-1 nelle cellule tumorali con espressione di TENM1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.