TDRD1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-410043

Panoramica

TDRD1 (Tudor domain containing 1) è una proteina legante l’RNA arricchita nella linea germinale, che riconosce residui di arginina dimetilati simmetricamente sulle proteine della famiglia PIWI e favorisce l’assemblaggio della via dei piRNA. Attraverso queste interazioni, TDRD1 contribuisce al silenziamento dei trasposoni, al mantenimento dell’integrità del genoma e al corretto avanzamento della spermatogenesi coordinando la biogenesi dei piRNA e l’organizzazione dei granuli germinali. L’alterazione della sorveglianza dei piRNA dipendente da TDRD1 è associata a difetti nello sviluppo delle cellule germinali maschili e a fenotipi di fertilità compromessa, a testimonianza del suo ruolo centrale nella protezione del genoma della linea germinale. L’espressione alterata e i programmi germinali deregolati che coinvolgono TDRD1 sono stati inoltre studiati nel contesto della biologia degli antigeni cancro-testis e della deregolazione epigenetica nei tumori.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TDRD1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene TDRD1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del TDRD1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto TDRD1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TDRD1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di TDRD1 per lo studio della segnalazione di TDRD1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni TDRD1 critici per la funzione di TDRD1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di TDRD1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal TDRD1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal TDRD1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus TDRD1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal TDRD1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR TDRD1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia TDRD1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio TDRD1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.