Tctex1 Plasmide Double Nickase (m): sc-423318-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Tctex1 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Tctex1 Double Nickase Plasmid (m) e il Tctex1 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Dynlt1b. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Tctex1 Plasmide Double Nickase (m) | sc-423318-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Tctex1 Plasmide Double Nickase (m2) | sc-423318-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Dynlt1b codifica la catena leggera Tctex1 del dynein citoplasmatico nel topo, un complesso motore basato sui microtubuli che guida il trasporto retrogrado, il posizionamento degli organelli e le funzioni del fuso mitotico. Tctex1 contribuisce al traffico, dipendente da dynein, di vescicole e complessi proteici, sostenendo processi quali la segnalazione intracellulare, il trasporto neuronale e la ciliogenesi attraverso una dinamica coordinata dei microtubuli. L’alterazione delle interazioni delle catene leggere del dynein può compromettere il legame al carico e la fedeltà del trasporto, collegando la disfunzione della via del dynein a fenotipi rilevanti per il neurosviluppo, la biologia delle ciglia e il controllo della divisione cellulare. Di conseguenza, Dynlt1b è spesso studiato nel contesto della regolazione del citoscheletro, dell’organizzazione del centrosoma/fuso e delle vie di segnalazione dipendenti dal trasporto.
Tctex1 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Dynlt1b nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Dynlt1b. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Dynlt1b. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Dynlt1b interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.