TCTE2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423316

Panoramica

Tcte2 codifica TCTE2, una proteina associata a ciglia e flagelli implicata nell’assemblaggio e nella funzione degli assonemi motili nelle cellule di topo. Supportando lo scorrimento dei microtubuli guidato dalla dineina e il battito ciliare coordinato, TCTE2 contribuisce a processi quali la maturazione degli spermatidi e la motilità degli spermatozoi, collegandosi così alla biologia riproduttiva e alla ciliogenesi. L’alterazione, in senso ampio, dei componenti delle ciglia motili può influire sulla clearance mucociliare, sul flusso del liquido cerebrospinale e sulla definizione dell’asse sinistra–destra, rendendo TCTE2 rilevante per studi meccanicistici sulle ciliopatie. TCTE2 è quindi utile per indagare l’organizzazione assonemale, l’omeostasi associata al trasporto intraflagellare e le conseguenze specifiche per tipo cellulare di una motilità compromessa.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TCTE2 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Tcte2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Tcte2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Tcte2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TCTE2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Tcte2 per lo studio della segnalazione di TCTE2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Tcte2 critici per la funzione di TCTE2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Tcte2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal TCTE2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal TCTE2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Tcte2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal TCTE2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR TCTE2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Tcte2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Tcte2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.