TCP-1 γ Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-403203

Panoramica

CCT3 codifica la subunità gamma della chaperonina umana contenente TCP-1 (TCP-1 γ), un componente centrale del complesso citosolico TRiC/CCT che promuove il ripiegamento, dipendente dall’ATP, di un ampio insieme di proteine client. TRiC/CCT поддерживает la proteostasi assistendo la maturazione di proteine del citoscheletro come actina e tubulina e influenzando il ripiegamento e la stabilità di regolatori della segnalazione e del ciclo cellulare. Attraverso questi ruoli, TCP-1 γ contribuisce all’organizzazione del citoscheletro, al controllo qualità delle proteine e alla capacità proliferativa; alterazioni della funzione della chaperonina sono state collegate a stress proteotossico e a una segnalazione di crescita modificata. Un’espressione deregolata delle subunità CCT è stata riportata in molteplici contesti patologici, a sostegno del suo studio in vie rilevanti per la trasformazione oncogenica e per il misfolding proteico associato alla neurodegenerazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TCP-1 γ (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CCT3 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CCT3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CCT3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TCP-1 γ.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CCT3 per lo studio della segnalazione di TCP-1 γ, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni CCT3 critici per la funzione di TCP-1 γ
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CCT3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal TCP-1 γ CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal TCP-1 γ CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CCT3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal TCP-1 γ Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR TCP-1 γ (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CCT3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CCT3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.