TBX4 Plasmide Double Nickase (h): sc-405242-NIC

TBX4 codifica un fattore di trascrizione della famiglia T-box che si lega al DNA tramite un dominio T-box conservato, regolando programmi di espressione genica che controllano la differenziazione mesenchimale embrionale, la definizione dei pattern degli arti e l’organogenesi. Durante lo sviluppo umano, l’attività di TBX4 si integra con le reti di segnalazione WNT, BMP e FGF per coordinare la specificazione dei progenitori e la morfogenesi dei tessuti. Una funzione alterata di TBX4 è implicata in fenotipi congeniti dello sviluppo, incluse malformazioni degli arti e patologie vascolari polmonari, rendendolo un bersaglio rilevante per lo studio del controllo trascrizionale delle vie di sviluppo. In quanto regolatore nucleare, TBX4 rappresenta un nodo sperimentalmente accessibile per indagare la logica enhancer–promoter, le decisioni di linea cellulare e i circuiti trascrizionali a valle in modelli cellulari pertinenti.

TBX4 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus TBX4 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di TBX4. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di TBX4. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con TBX4 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.