TBX3 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400754-LAC

TBX3 codifica un fattore di trascrizione della famiglia T-box che si lega al DNA tramite un dominio T-box conservato per regolare programmi genici dello sviluppo, decisioni di destino cellulare e patterning tissutale. Nelle cellule umane, TBX3 agisce principalmente come repressore trascrizionale o come modulatore dell’espressione genica dipendente dal contesto, integrando segnali che influenzano il controllo del ciclo cellulare, la differenziazione e la senescenza. Interseca vie che governano la specificazione di linea e la proliferazione, incluse reti collegate alla segnalazione Wnt/β-catenina e ai checkpoint associati a p53. Un’espressione deregolata di TBX3 è stata associata a disturbi congeniti dello sviluppo ed è stata studiata in biologia del cancro per i suoi ruoli nella proliferazione, nell’invasività e in stati trascrizionali di tipo “stem-like”.

Le particelle di attivazione lentivirale TBX3 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di TBX3 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale TBX3 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione TBX3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di TBX3. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo TBX3 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.