TBX3 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400754-ACT

TBX3 codifica un fattore di trascrizione della famiglia T-box che regola la strutturazione dello sviluppo, le decisioni di destino cellulare e la morfogenesi tissutale attraverso il legame al DNA in modo specifico per sequenza e la repressione o l’attivazione trascrizionale. Nelle cellule umane, TBX3 si integra con i programmi di crescita e differenziamento, intersecando vie di segnalazione che controllano proliferazione, senescenza, dinamiche epitelio-mesenchimali e specificazione di linea. Un’espressione deregolata di TBX3 è stata associata a fenotipi di sviluppo alterati ed è stata studiata per il suo ruolo in reti trascrizionali oncogene che influenzano il controllo del ciclo cellulare e caratteristiche metastatiche. In quanto regolatore nucleare, TBX3 viene comunemente indagato mediante ingegneria genomica e profilazione del trascrittoma per mappare i bersagli a valle e programmi trascrizionali dipendenti dal contesto.

TBX3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di TBX3 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

TBX3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus TBX3 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione TBX3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di TBX3. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus TBX3 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da TBX3 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via TBX3 nelle cellule tumorali con espressione di TBX3 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.