TBX20 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404350-ACT

TBX20 codifica un fattore di trascrizione della famiglia T-box che svolge un ruolo centrale nella specificazione della linea cardiaca e nella maturazione delle camere, coordinando reti di regolazione genica nel miocardio in sviluppo e in quello adulto. TBX20 si integra con i programmi cardiogenici fondamentali che coinvolgono NKX2-5, GATA4 e i fattori della famiglia MEF2 per modulare gli output trascrizionali che controllano la proliferazione, la differenziazione e le proprietà di conduzione elettrica dei cardiomiociti. Attraverso questi circuiti trascrizionali, TBX20 influenza vie che regolano l’organizzazione del sarcomero, il rimodellamento della matrice extracellulare e la morfogenesi cardiaca. Alterazioni nell’espressione o nella funzione di TBX20 sono state associate a difetti cardiaci congeniti e cardiomiopatie, rendendolo un nodo utile per modellare la disregolazione trascrizionale nella biologia cardiovascolare.

TBX20 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di TBX20 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

TBX20 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus TBX20 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione TBX20, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di TBX20. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus TBX20 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da TBX20 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via TBX20 nelle cellule tumorali con espressione di TBX20 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.