TBK1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401066-ACT

ヒトTBK1（TANK-binding kinase 1）は、自然免疫およびストレス応答シグナルを統合するセリン／スレオニンキナーゼであり、パターン認識受容体の下流で機能してIRF3/IRF7をリン酸化し、I型インターフェロン応答を誘導します。TBK1はまたNF-κBシグナル伝達を調節し、OPTNやp62/SQSTM1などのオートファジー受容体をリン酸化することで選択的オートファジーやマイトファジーを制御し、炎症シグナルと細胞の品質管理を結び付けています。TBK1活性の破綻は慢性炎症性表現型や神経変性過程と関連しており、TBK1の機能喪失変異は、オートファジー障害および免疫シグナルの変調を介してALS/FTDのリスクに関与するとされています。これらの特性からTBK1は、ヒト細胞モデルにおけるcGAS–STINGシグナル、抗ウイルス応答、ならびにオートファジー関連プロテオスタシスの研究における重要な結節点となります。

TBK1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TBK1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

TBK1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TBK1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTBK1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性TBK1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTBK1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTBK1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTBK1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTBK1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。