TBC1D20 Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-426458-LAC

Il gene murino *Tbc1d20* codifica TBC1D20, una proteina attivante la GTPasi Rab contenente un dominio TBC che regola il traffico di membrana accelerando l’idrolisi del GTP su specifiche proteine Rab. TBC1D20 si localizza prevalentemente nel reticolo endoplasmatico e contribuisce all’omeostasi del RE, all’organizzazione della via secretoria e alle dinamiche di trasporto Golgi-RE che modellano la gestione dei lipidi e la morfologia degli organelli. Attraverso questi ruoli, influenza processi quali l’ancoraggio e la fusione delle vescicole, lo smistamento del carico e il mantenimento dell’identità dei compartimenti intracellulari. La disregolazione del traffico dipendente da Rab e della funzione del RE è rilevante per studi sullo stress metabolico, la neurobiologia e la proteostasi cellulare, rendendo *Tbc1d20* un nodo utile per l’analisi delle vie biologiche in modelli murini.

Le particelle di attivazione lentivirale TBC1D20 (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Tbc1d20 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale TBC1D20 (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Tbc1d20, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di TBC1D20. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Tbc1d20 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.