Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
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TBC1D20 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-426458-ACT
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- TBC1D20 Plasmide di attivazione CRISPR (m) è un mediatore sinergico di attivazione (SAM) del sistema di attivazione trascrizionale disegnato per upregolare specificatamente l'espressione genica
- TBC1D20 CRISPR Activation Plasmid (m) consiste di tre plasmidi in proporzione 1:1:1 : un plasmide che codifica la nucleasi (D10A and N863A) Cas9 (dCas9) deattivata fusa al dominio di transattivazione VP64, ed un gene di resistenza alla blasticina; un plasmide che codifica per la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, ed un gene di resistenza all'igromicina;un plasmide che codifica un RNA guida di 20 nt target specifico, e un gene di resistenza alla puromicina.
- Il complesso SAM legae una regione sito-specifica circa 200-250 nt a monte del sito di start trascrizionale e fornisce un robusto reclutamento di fattori trascrizionali per un'attivazione altamente efficiente del gene target
- I gRNA codificati dal TBC1D20 CRISPR Activation Plasmid (m) e dal TBC1D20 CRISPR Activation Plasmid (m2) prendono di mira regioni regolatorie distinte a monte del sito di inizio della trascrizione di Tbc1d20. Uno o entrambi i modelli potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: TBC1D20 Antibody (F-9): sc-515697
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
TBC1D20 Plasmide di attivazione CRISPR (m) | sc-426458-ACT | 20 µg | $397.00 |
Tbc1d20 codifica TBC1D20, una proteina attivatrice della GTPasi Rab (Rab GTPase-activating protein) che regola il traffico di membrana dipendente da Rab e mantiene l’organizzazione del reticolo endoplasmatico (RE). Accelerando l’idrolisi del GTP su specifiche proteine Rab, TBC1D20 influenza la formazione delle vescicole, lo smistamento del carico e le dinamiche RE–Golgi che modellano l’omeostasi della via secretoria. L’alterazione di questi processi può perturbare il metabolismo lipidico e la morfologia degli organelli, collegando le reti di traffico regolate da TBC1D20 alle risposte cellulari allo stress. Nei modelli murini, lo studio della funzione di Tbc1d20 supporta l’analisi meccanicistica delle vie di trasporto intracellulare rilevanti per fenotipi neuro-sviluppativi e metabolici.
TBC1D20 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Tbc1d20 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.
TBC1D20 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Tbc1d20 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.
Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Tbc1d20, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di TBC1D20. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Tbc1d20 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da TBC1D20 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via TBC1D20 nelle cellule tumorali con espressione di Tbc1d20 silenziata o ridotta.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.