TARSL1 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-410152-LAC

TARS2 codifica la treonil‑tRNA sintetasi mitocondriale TARSL1, una ligasi aminoacil‑tRNA necessaria per caricare il tRNA mitocondriale^Thr e sostenere la traduzione delle subunità della fosforilazione ossidativa (OXPHOS) codificate dal mtDNA. Sostenendo la sintesi proteica mitocondriale, TARSL1 contribuisce all’assemblaggio della catena respiratoria, alla produzione di ATP e a risposte integrate allo stress mitocondriale che modulano il metabolismo e le decisioni sul destino cellulare. L’alterazione della traduzione mitocondriale è strettamente associata a bioenergetica compromessa, omeostasi redox alterata e attivazione di vie di segnalazione compensatorie, rendendo la funzione di TARS2/TARSL1 rilevante per studi sulla disfunzione mitocondriale nella neurodegenerazione, nelle malattie cardiometaboliche e nel metabolismo del cancro. In quanto componente centrale dell’espressione genica mitocondriale, TARSL1 offre anche un punto di accesso meccanicistico per indagare la comunicazione mito‑nucleare e il controllo della traduzione nelle cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale TARSL1 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di TARS2 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale TARSL1 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione TARS2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di TARSL1. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo TARS2 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.