TARC Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-401905-LAC

Il gene umano **CCL17** codifica la chemiochina regolata dal timo e dall’attivazione (**TARC**), una chemiochina CC secreta che segnala principalmente attraverso **CCR4** per guidare la chemiotassi di cellule T polarizzate verso **Th2**, cellule T regolatorie e altre sottopopolazioni di leucociti **CCR4-positive**. La produzione di TARC da parte di cellule dendritiche, cellule endoteliali e cellule epiteliali collega il riconoscimento dell’immunità innata al traffico dell’immunità adattativa e contribuisce al posizionamento dei leucociti nei tessuti infiammati. Questo asse interagisce con programmi infiammatori guidati da citochine e regola il reclutamento delle cellule immunitarie, il loro stato di attivazione e la loro residenza tissutale. L’espressione disregolata di CCL17/TARC è spesso studiata nell’infiammazione allergica, nell’asma, nella dermatite atopica e in altre condizioni immuno-mediate, in cui una migrazione alterata dipendente da CCR4 modella la composizione immunitaria locale.

Le particelle di attivazione lentivirale TARC (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di CCL17 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale TARC (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione CCL17, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di TARC. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo CCL17 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.