TARC CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-422837

Übersicht

Ccl17 kodiert den Thymus- und aktivierungsregulierten Chemokin TARC (TARC/CCL17), ein sezerniertes CC-Chemokin, das an CCR4 bindet und so die Chemotaxis CCR4-positiver T‑Zell-Subpopulationen, einschließlich Th2-Zellen und regulatorischer T‑Zellen, steuert. In murinen Immungeweben trägt TARC zum Leukozyten-Trafficking bei, prägt Zusammensetzung und Polarisierung entzündlicher Infiltrate und koordiniert antigengetriebene Antworten. Die Ccl17-Expression wird häufig nachgeschaltet an Zytokin-Signale und an die Aktivierung von Pattern-Recognition-Rezeptoren in myeloiden und stromalen Kompartimenten induziert und verknüpft damit angeborene Signale mit der Rekrutierung adaptiver Zellen. Eine Fehlregulation der Ccl17/TARC-Signalgebung ist mit allergieartiger Entzündung und immunvermittelter Pathologie assoziiert, was sie zu einem nützlichen Ansatzpunkt für die Untersuchung von Chemokin-Gradienten, Barriereentzündung und T‑Zell–Myeloid-Crosstalk macht.

Das TARC CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Ccl17-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Ccl17-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Ccl17 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die TARC-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Ccl17-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der TARC-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Ccl17-Exone abzielen, die für die TARC-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Ccl17-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom TARC CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom TARC CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Ccl17-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das TARC HDR-Plasmid (m) und TARC HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Ccl17-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Ccl17-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.