TARC Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422837

Panoramica

Ccl17 codifica la chemiochina regolata dal timo e dall’attivazione (TARC/CCL17), una chemiochina CC secreta che si lega a CCR4 per dirigere la chemiotassi di sottopopolazioni di cellule T positive per CCR4, tra cui le cellule Th2 e le cellule T regolatorie. Nei tessuti immunitari murini, TARC contribuisce al traffico dei leucociti, modellando la composizione e la polarizzazione degli infiltrati infiammatori e coordinando le risposte guidate dall’antigene. L’espressione di Ccl17 è comunemente indotta a valle della segnalazione citochinica e dell’attivazione dei recettori di riconoscimento di pattern nei compartimenti mieloidi e stromali, collegando gli stimoli dell’immunità innata al reclutamento di cellule adattative. Una segnalazione Ccl17/TARC deregolata è associata a un’infiammazione di tipo allergico e a patologie immuno-mediate, rendendola un nodo utile per studiare i gradienti chemiochinici, l’infiammazione delle barriere e il crosstalk tra cellule T e mieloidi.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TARC (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Ccl17 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Ccl17 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Ccl17 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TARC.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Ccl17 per lo studio della segnalazione di TARC, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Ccl17 critici per la funzione di TARC
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Ccl17 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal TARC CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal TARC CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Ccl17. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal TARC Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR TARC (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Ccl17 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Ccl17 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.