TARC CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401905-ACT

CCL17は、胸腺・活性化調節ケモカイン（TARC）をコードしている。TARCは分泌型のCCケモカインであり、Th2に偏ったサブセットを含むCCR4発現T細胞を、炎症部位へと指向性に遊走させる。TARCは、白血球トラフィッキングおよび樹状細胞—T細胞間コミュニケーションを形成することで、組織内における免疫細胞の配置と、ケモカインシグナル伝達ネットワークにおけるサイトカイン駆動性応答の協調に寄与する。CCL17/TARCの発現異常は、走化性勾配の変化が免疫細胞浸潤や組織リモデリングに影響するアレルギー性炎症やその他の免疫介在性病態で、しばしば研究対象となる。ヒトのモデル系では、CCL17は炎症回路の活性化を読み出す扱いやすい指標であり、ケモカイン—受容体軸の挙動を検証するためのノードとしても用いられる。

TARC CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CCL17の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

TARC CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CCL17 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCCL17転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性TARCの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCCL17遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTARC依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCCL17発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTARC経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。