TAP2 Plasmide Double Nickase (m): sc-423266-NIC

Il gene murino *Tap2* codifica TAP2, un trasportatore della famiglia ABC (ATP-binding cassette) che forma un eterodimero con TAP1 per traslocare peptidi derivati dal proteasoma dal citosol al reticolo endoplasmatico, dove vengono caricati sulle molecole MHC di classe I. Questo passaggio di trasporto è centrale nell’elaborazione e presentazione dell’antigene e si integra con la degradazione proteasomiale, il caricamento dei peptidi nel RE e le vie di sorveglianza immunitaria. Un’attività alterata di TAP2 può rimodellare l’immunopeptidoma e influenzare l’espressione di MHC I sulla superficie cellulare, con implicazioni per studi sulle interazioni ospite–patogeno, sui meccanismi di evasione immunitaria dei tumori e sull’infiammazione guidata dal sistema immunitario in modelli sperimentali. *Tap2* è quindi ampiamente utilizzato come nodo genetico per analizzare i programmi di presentazione dell’antigene responsivi all’interferone e i determinanti del riconoscimento da parte delle cellule T.

TAP2 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Tap2 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Tap2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Tap2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Tap2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.