TALK-1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406360

Panoramica

KCNK16 codifica TALK-1 (K2P16.1), un canale del potassio a due pori che contribuisce alla conduttanza basale di K⁺ e determina il potenziale di membrana a riposo nelle cellule eccitabili e secretorie. Regolando l’eccitabilità di membrana, TALK-1 influenza l’ingresso di Ca²⁺ voltaggio-dipendente e le vie di segnalazione a valle accoppiate al Ca²⁺, che modellano l’accoppiamento stimolo–secrezione e le risposte cellulari allo stress. Il canale è arricchito negli isolotti pancreatici, dove alterazioni del flusso di K⁺ possono modulare l’attività elettrica delle cellule β e la dinamica del rilascio di insulina. Studi genetici e funzionali hanno collegato l’attività di KCNK16/TALK-1 a tratti metabolici, rendendolo rilevante per la ricerca meccanicistica nella segnalazione associata al diabete e nella fisiologia dei canali ionici.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TALK-1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene KCNK16 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del KCNK16 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto KCNK16 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TALK-1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di KCNK16 per lo studio della segnalazione di TALK-1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni KCNK16 critici per la funzione di TALK-1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di KCNK16 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal TALK-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal TALK-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus KCNK16. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal TALK-1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR TALK-1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia KCNK16 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio KCNK16 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.