TAF II p135 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-404230

Panoramica

TAF4 codifica TAF II p135, una subunità centrale del complesso TFIID che coopera con TBP e altri TAF per avviare la trascrizione dipendente dalla RNA polimerasi II. Attraverso interazioni con fattori di trascrizione specifici di sequenza e regolatori associati alla cromatina, TAF II p135 contribuisce al riconoscimento del promotore, all’assemblaggio del complesso di pre-inizio e al controllo di programmi di espressione genica dipendenti dallo stato cellulare. La funzione di TAF4 è strettamente legata al rimodellamento della cromatina e alle reti di coattivatori trascrizionali, collegandola alla regolazione di proliferazione, differenziamento e trascrizione in risposta allo stress. L’alterazione dell’attività di TFIID/TAF e dell’inizio della trascrizione è spesso studiata nel contesto della riprogrammazione trascrizionale oncogenica e di altri disturbi della regolazione genica.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TAF II p135 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene TAF4 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del TAF4 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto TAF4 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TAF II p135.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di TAF4 per lo studio della segnalazione di TAF II p135, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni TAF4 critici per la funzione di TAF II p135
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di TAF4 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal TAF II p135 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal TAF II p135 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus TAF4. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal TAF II p135 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR TAF II p135 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia TAF4 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio TAF4 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.