TADA3L Plasmide Double Nickase (h): sc-409222-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- TADA3L Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il TADA3L Double Nickase Plasmid (h) e il TADA3L Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira TADA3. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: TADA3L Antibody (D-10): sc-166118
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
TADA3L Plasmide Double Nickase (h) | sc-409222-NIC | 20 µg | $410.00 |
TADA3 codifica TADA3L, un adattatore trascrizionale che opera all’interno di complessi con attività istone acetiltransferasica come SAGA/GCN5, coordinando il rimodellamento della cromatina e la trascrizione dipendente dall’RNA polimerasi II. Collegando fattori di trascrizione specifici di sequenza all’acetilazione dei substrati istonici, TADA3L contribuisce a regolare programmi di espressione genica che controllano la progressione del ciclo cellulare, le risposte al danno al DNA e la differenziazione. La perturbazione di questo asse può modificare gli stati epigenetici e la fedeltà trascrizionale, processi spesso implicati nella biologia dei tumori e in altri disturbi guidati da una deregolazione della cromatina e della trascrizione. Di conseguenza, TADA3L è comunemente studiato in vie che collegano la co-attivazione trascrizionale con il mantenimento del genoma e la segnalazione dello stress cellulare.
TADA3L Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus TADA3 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di TADA3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di TADA3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con TADA3 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.