TAB3 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404049-ACT

La TAB3 (TAK1-binding protein 3) umana è un componente di impalcatura e regolatorio del modulo di segnalazione TAB/TAK1 che collega segnali provenienti da recettori a monte e stimoli di stress all’attivazione delle vie NF-κB e MAPK. Coordinando l’assemblaggio di complessi chinasi a valle della segnalazione mediata da recettori di riconoscimento di pattern e da citochine, TAB3 contribuisce a plasmare programmi trascrizionali che controllano le risposte infiammatorie, la sopravvivenza cellulare e l’adattamento allo stress. Una segnalazione deregolata attraverso reti dipendenti da TAK1 è stata implicata in contesti di infiammazione cronica e di segnalazione oncogena, rendendo TAB3 rilevante per analizzare l’architettura delle vie e il controllo tramite feedback. Per questo motivo, l’espressione e la funzione di TAB3 vengono comunemente studiate nella segnalazione dell’immunità innata, nel cross-talk della trasduzione del segnale e nella regolazione trascrizionale dipendente dallo stimolo.

TAB3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di TAB3 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

TAB3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus TAB3 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione TAB3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di TAB3. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus TAB3 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da TAB3 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via TAB3 nelle cellule tumorali con espressione di TAB3 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.