T1R3 Plasmide Double Nickase (h): sc-401808-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- T1R3 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il T1R3 Double Nickase Plasmid (h) e il T1R3 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira TAS1R3. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
T1R3 Plasmide Double Nickase (h) | sc-401808-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
T1R3 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401808-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TAS1R3 codifica il recettore del gusto umano di tipo 1 membro 3 (T1R3), un GPCR di classe C che forma eterodimeri con TAS1R1 o TAS1R2 per costituire recettori sensibili ai nutrienti responsabili, rispettivamente, della percezione dell’umami e del dolce. In seguito al legame con il ligando, i recettori contenenti T1R3 si accoppiano a proteine G e attivano la segnalazione PLCβ2–IP3, la mobilizzazione del Ca²⁺ intracellulare e i programmi a valle mediati da MAPK e di secrezione. Oltre alle papille gustative orali, l’espressione di TAS1R3 nei tessuti gastrointestinali e metabolici lo collega alla segnalazione enteroendocrina e alla regolazione, in risposta ai nutrienti, del rilascio ormonale e della funzione epiteliale. Vie di percezione del dolce/umami disregolate che coinvolgono T1R3 sono state studiate in contesti quali disfunzioni metaboliche, infiammazione e alterata segnalazione chemosensoriale in microambienti associati al cancro.
T1R3 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus TAS1R3 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di TAS1R3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di TAS1R3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con TAS1R3 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.