Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
T-type Ca++ CP α1H Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401147
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- T-type Ca++ CP α1H Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico T-type Ca++ CP α1H, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: T-type Ca++ CP α1H Antibody (G-10): sc-377510
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
T-type Ca++ CP α1H Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-401147 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
CACNA1H codifica la subunità α1H formante il poro del canale del calcio di tipo T CaV3.2, che media un ingresso di Ca2+ attivato a bassi voltaggi e contribuisce a modulare l’eccitabilità di membrana, l’attività pacemaker e la regolazione genica dipendente dal calcio. Controllando le oscillazioni sotto-soglia e i transitori intracellulari di Ca2+, CaV3.2 si integra in processi di segnalazione che influenzano il rilascio di neurotrasmettitori, la secrezione ormonale e programmi trascrizionali dipendenti dall’attività. Alterazioni della funzione di CACNA1H sono state implicate in disturbi dell’eccitabilità, tra cui la suscettibilità all’epilessia, i meccanismi del dolore neuropatico e fenotipi del ritmo cardiaco, e il gene è anche studiato in relazione a proliferazione e sopravvivenza delle cellule tumorali. In quanto canale ionico nodale nelle reti di segnalazione eccitatoria, CACNA1H è spesso oggetto di indagine per chiarire le vie dipendenti dall’ingresso di calcio e il rimodellamento del “channelome”.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO T-type Ca++ CP α1H (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CACNA1H in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CACNA1H insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CACNA1H a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina T-type Ca++ CP α1H.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CACNA1H per lo studio della segnalazione di T-type Ca++ CP α1H, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni CACNA1H critici per la funzione di T-type Ca++ CP α1H
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CACNA1H per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal T-type Ca++ CP α1H CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal T-type Ca++ CP α1H CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CACNA1H. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal T-type Ca++ CP α1H Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR T-type Ca++ CP α1H (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CACNA1H per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CACNA1H definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.