SZT2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-411718

Panoramica

SZT2 (seizure threshold 2) codifica una grande proteina citosolica che funge da regolatore negativo della segnalazione di mTORC1 attraverso il complesso KICSTOR, collegando la disponibilità di nutrienti e amminoacidi al controllo lisosomiale dell’attività di mTORC1. Limitando l’attivazione di mTORC1, SZT2 contribuisce a mantenere l’omeostasi cellulare in processi quali autofagia, metabolismo e segnalazione della crescita. L’alterazione di SZT2 è stata associata a fenotipi di neurosviluppo ed encefalopatie epilettiche, in linea con un’alterata percezione dei nutrienti e una disregolazione della via di mTOR nei neuroni. Di conseguenza, SZT2 è spesso studiato in modelli di eccitabilità neuronale, segnalazione associata ai lisosomi e risposte allo stress dipendenti da mTORC1.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO SZT2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene SZT2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del SZT2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto SZT2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina SZT2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di SZT2 per lo studio della segnalazione di SZT2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni SZT2 critici per la funzione di SZT2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di SZT2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal SZT2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal SZT2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus SZT2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal SZT2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR SZT2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia SZT2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio SZT2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.