SYP/Synaptophysin Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423242

Visão geral

Syp codifica a sinaptofisina (SYP), uma glicoproteína abundante da membrana das vesículas sinápticas, amplamente utilizada como marcador pré-sináptico no sistema nervoso de camundongos. A SYP participa do tráfego de vesículas sinápticas, da exo-endocitose e da reciclagem dependente de atividade por meio de interações com a maquinaria de fusão vesicular e de endocitose, ajudando a manter a capacidade de liberação de neurotransmissores. Alterações na expressão da sinaptofisina e na dinâmica das vesículas pré-sinápticas têm sido associadas à desorganização da conectividade sináptica e são frequentemente avaliadas em estudos de mecanismos do neurodesenvolvimento e da neurodegeneração. Como componente central dos terminais pré-sinápticos, a SYP oferece um ponto de entrada funcional para dissecar mudanças em nível de circuito que emergem de um ciclo vesicular comprometido.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO SYP/Synaptophysin (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Syp em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Syp, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Syp na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína SYP/Synaptophysin.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Syp para a investigação da sinalização de SYP/Synaptophysin, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Syp críticos para a função SYP/Synaptophysin
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Syp para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo SYP/Synaptophysin Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo SYP/Synaptophysin Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Syp. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo SYP/Synaptophysin Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR SYP/Synaptophysin (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Syp para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Syp definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.