SYP/Synaptophysin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423242

Panoramica

Syp codifica la sinaptofisina (SYP), un’abbondante glicoproteina di membrana delle vescicole sinaptiche ampiamente utilizzata come marcatore presinaptico nel sistema nervoso del topo. SYP partecipa al traffico delle vescicole sinaptiche, all’eso-endocitosi e al riciclo dipendente dall’attività attraverso interazioni con i macchinari di fusione vescicolare e di endocitosi, contribuendo a mantenere la competenza al rilascio dei neurotrasmettitori. Alterazioni dell’espressione della sinaptofisina e della dinamica delle vescicole presinaptiche sono state associate a una connettività sinaptica compromessa e vengono frequentemente valutate in studi sui meccanismi neuroevolutivi e neurodegenerativi. In quanto componente fondamentale dei terminali presinaptici, SYP offre un punto d’ingresso funzionale per analizzare i cambiamenti a livello di circuito che emergono da un riciclo vescicolare alterato.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO SYP/Synaptophysin (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Syp in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Syp insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Syp a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina SYP/Synaptophysin.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Syp per lo studio della segnalazione di SYP/Synaptophysin, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Syp critici per la funzione di SYP/Synaptophysin
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Syp per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal SYP/Synaptophysin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal SYP/Synaptophysin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Syp. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal SYP/Synaptophysin Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR SYP/Synaptophysin (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Syp per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Syp definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.