Syntaxin 3 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403466-ACT

STX3 codifica per la sintaxina 3, una t-SNARE localizzata sulla membrana plasmatica che media l’ancoraggio delle vescicole e la fusione di membrana durante l’esocitosi polarizzata. La sintaxina 3 agisce insieme alle proteine della famiglia SNAP e alle VAMP per regolare il traffico apicale nelle cellule epiteliali e la consegna mirata dei carichi in neuroni e cellule immunitarie, influenzando il riciclo delle proteine di membrana e la secrezione. Attraverso il suo ruolo nello smistamento endosomiale e nelle vie esocitiche, STX3 contribuisce al mantenimento della polarità cellulare, dell’organizzazione delle giunzioni e della funzione di barriera. Un traffico dipendente dalle SNARE deregolato che coinvolge STX3 è stato implicato in disturbi della polarità epiteliale e della funzione neurale, a supporto del suo studio in vie rilevanti per l’organizzazione cellulare e per fenotipi di trasporto associati a malattia.

Syntaxin 3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di STX3 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Syntaxin 3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus STX3 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione STX3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Syntaxin 3. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus STX3 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Syntaxin 3 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Syntaxin 3 nelle cellule tumorali con espressione di STX3 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.