Syntaxin 10 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406240

Panoramica

STX10 codifica per Syntaxin 10, una proteina t-SNARE localizzata principalmente nel trans-Golgi network e nelle membrane endosomiali, dove regola l’attracco delle vescicole e la fusione di membrana. Attraverso interazioni con altri componenti SNARE e fattori di tethering, Syntaxin 10 contribuisce a controllare il recupero endosoma-verso-Golgi e il traffico post-Golgi, supportando il riciclo dei recettori, il trasporto correlato ai lisosomi e l’omeostasi complessiva della via secretoria. L’alterazione del traffico dipendente da STX10 può modificare lo smistamento dei carichi e la dinamica degli organelli, processi spesso implicati nella segnalazione immunitaria, nella neurobiologia e nelle risposte cellulari allo stress. Programmi di trasporto vescicolare alterati che coinvolgono la macchina SNARE sono stati associati a fenotipi rilevanti per la malattia, inclusi infiammazione disregolata e disfunzioni del neurosviluppo in sistemi modello.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Syntaxin 10 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene STX10 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del STX10 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto STX10 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Syntaxin 10.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di STX10 per lo studio della segnalazione di Syntaxin 10, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni STX10 critici per la funzione di Syntaxin 10
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di STX10 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Syntaxin 10 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Syntaxin 10 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus STX10. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Syntaxin 10 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Syntaxin 10 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia STX10 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio STX10 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.