Synoviolin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-403476

Panoramica

Il gene umano SYVN1 codifica la sinoviolina, una ligasi E3 dell’ubiquitina di tipo RING residente nel reticolo endoplasmatico (RE), che funge da componente centrale della degradazione associata al RE (ERAD) per ubiquitinare le proteine mal ripiegate e promuoverne la rimozione tramite il proteasoma. Attraverso il controllo qualità delle proteine del RE, la sinoviolina contribuisce a mantenere la proteostasi e modula la segnalazione della risposta alle proteine mal ripiegate (unfolded protein response, UPR), collegando lo stress del RE a valle a vie infiammatorie e di sopravvivenza cellulare. L’attività di SYVN1 è stata associata anche alla regolazione dell’apoptosi e del controllo del ciclo cellulare attraverso la degradazione ubiquitina-dipendente di substrati chiave, influenzando l’adattamento cellulare allo stress cronico. Un’espressione deregolata di SYVN1 o una capacità alterata dell’ERAD sono implicate in meccanismi rilevanti per la patologia, tra cui l’iperplasia sinoviale e la patologia articolare infiammatoria, oltre che in contesti più ampi di squilibrio della proteostasi.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Synoviolin (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene SYVN1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del SYVN1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto SYVN1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Synoviolin.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di SYVN1 per lo studio della segnalazione di Synoviolin, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni SYVN1 critici per la funzione di Synoviolin
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di SYVN1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Synoviolin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Synoviolin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus SYVN1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Synoviolin Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Synoviolin (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia SYVN1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio SYVN1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.