SYND4/SDC4/Syndecan-4 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400502-ACT

SDC4 codifica la sindecano-4 (SYND4), un proteoglicano transmembrana a eparan solfato che funge da co-recettore per proteine della matrice extracellulare, chemochine e fattori di crescita, coordinando la segnalazione cellula–matrice. Attraverso interazioni con integrine e adattatori del citoscheletro, SYND4 regola l’assemblaggio delle adesioni focali, la segnalazione mediata da PKCα e dalle GTPasi della famiglia Rho e le vie a valle che controllano migrazione, meccanotrasduzione e rimodellamento associato alla riparazione delle ferite. Alterazioni dell’espressione di SDC4 e del suo shedding sono state collegate a segnalazione infiammatoria, disfunzione vascolare e processi legati alla fibrosi, e il gene è spesso studiato in contesti quali le interazioni tumore–stroma e il comportamento cellulare invasivo. In quanto organizzatore di superficie della presentazione dei ligandi e della dinamica di adesione, SYND4 è ampiamente utilizzato come nodo per interrogare reti di segnalazione extracellulare e fenotipi quali motilità, integrità della barriera e rimodellamento della matrice.

SYND4/SDC4/Syndecan-4 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SDC4 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

SYND4/SDC4/Syndecan-4 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SDC4 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SDC4, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di SYND4/SDC4/Syndecan-4. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SDC4 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da SYND4/SDC4/Syndecan-4 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via SYND4/SDC4/Syndecan-4 nelle cellule tumorali con espressione di SDC4 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.