Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Synaptotagmin I Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-423243-ACT
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Synaptotagmin I Plasmide di attivazione CRISPR (m) è un mediatore sinergico di attivazione (SAM) del sistema di attivazione trascrizionale disegnato per upregolare specificatamente l'espressione genica
- Synaptotagmin I CRISPR Activation Plasmid (m) consiste di tre plasmidi in proporzione 1:1:1 : un plasmide che codifica la nucleasi (D10A and N863A) Cas9 (dCas9) deattivata fusa al dominio di transattivazione VP64, ed un gene di resistenza alla blasticina; un plasmide che codifica per la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, ed un gene di resistenza all'igromicina;un plasmide che codifica un RNA guida di 20 nt target specifico, e un gene di resistenza alla puromicina.
- Il complesso SAM legae una regione sito-specifica circa 200-250 nt a monte del sito di start trascrizionale e fornisce un robusto reclutamento di fattori trascrizionali per un'attivazione altamente efficiente del gene target
- I gRNA codificati dal Synaptotagmin I CRISPR Activation Plasmid (m) e dal Synaptotagmin I CRISPR Activation Plasmid (m2) prendono di mira regioni regolatorie distinte a monte del sito di inizio della trascrizione di Syt1. Uno o entrambi i modelli potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Synaptotagmin I Antibody (15): sc-136480
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Synaptotagmin I Plasmide di attivazione CRISPR (m) | sc-423243-ACT | 20 µg | $397.00 | |||
Synaptotagmin I Plasmide di attivazione CRISPR (m2) | sc-423243-ACT-2 | 20 µg | $397.00 |
Syt1 codifica la sinaptotagmina I, una proteina di membrana delle vescicole sinaptiche che funge da sensore del Ca²⁺, accoppiando l’ingresso di calcio al rilascio rapido e sincrono dei neurotrasmettitori. Attraverso il legame Ca²⁺-dipendente ai fosfolipidi e le interazioni con il macchinario SNARE, la sinaptotagmina I regola l’ancoraggio (docking), la preparazione (priming) e la fusione di membrana delle vescicole durante la trasmissione sinaptica. Syt1 è centrale per l’eccitabilità neuronale e la segnalazione dipendente dall’attività, e l’alterazione della sua espressione o funzione è ampiamente utilizzata per modellare difetti nella cinetica del rilascio sinaptico e nella plasticità dei circuiti. Nei sistemi murini, la biologia di Syt1 è spesso studiata nel contesto della ricerca sul neurosviluppo e sulle neurodegenerazioni, dove un rilascio presinaptico alterato può rimodellare il comportamento della rete.
Synaptotagmin I Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Syt1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.
Synaptotagmin I Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Syt1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.
Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Syt1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Synaptotagmin I. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Syt1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Synaptotagmin I nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Synaptotagmin I nelle cellule tumorali con espressione di Syt1 silenziata o ridotta.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.