Synaptojanin 2 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-411221-LAC

SYNJ2 codifica la sinaptojanina 2, una fosfatasi dei fosfoinositidi che idrolizza PI(4,5)P2 e PI(3,4,5)P3 per regolare la composizione lipidica della membrana durante l’endocitosi e il traffico dei recettori. Attraverso i suoi effetti sull’internalizzazione mediata da clatrina, sul rimodellamento dell’actina e sulla segnalazione dei fosfoinositidi, la sinaptojanina 2 contribuisce a coordinare la dinamica delle vescicole, il turnover delle adesioni focali e vie a valle come PI3K–AKT. Alterazioni dell’espressione o dell’attività di SYNJ2 sono state associate, in modelli di cancro, a migrazione deregolata e fenotipi invasivi, nonché a perturbazioni dell’omeostasi di membrana neuronale e sinaptica. Queste funzioni rendono SYNJ2 un bersaglio utile per studiare il controllo, guidato dai fosfoinositidi, del trasporto vescicolare, dell’attenuazione della segnalazione e dell’organizzazione del citoscheletro nelle cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Synaptojanin 2 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di SYNJ2 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Synaptojanin 2 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione SYNJ2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Synaptojanin 2. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo SYNJ2 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.