Synaptojanin 2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423241

Panoramica

Il gene murino **Synj2** codifica la **sinaptojanina 2**, una fosfatasi dei polifosfoinositidi che defosforila PI(4,5)P2 e fosfoinositidi correlati per coordinare il traffico di membrana e la segnalazione cellulare. La sinaptojanina 2 svolge un ruolo nell’endocitosi mediata da clatrina, nel riciclo endosomiale e nel rimodellamento del citoscheletro di actina, influenzando così l’internalizzazione dei recettori e la dinamica delle vie dipendenti dai fosfoinositidi. Attraverso la regolazione dei pool di fosfoinositidi, incide su processi cellulari quali migrazione, crescita dei neuriti e turnover delle vescicole. Un metabolismo dei fosfoinositidi deregolato e un controllo endocitico alterato sono stati implicati in ambito neurobiologico e negli adattamenti di segnalazione associati al cancro, rendendo **Synj2** un bersaglio utile per studi meccanicistici dell’omeostasi di membrana e della segnalazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Synaptojanin 2 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Synj2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Synj2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Synj2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Synaptojanin 2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Synj2 per lo studio della segnalazione di Synaptojanin 2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Synj2 critici per la funzione di Synaptojanin 2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Synj2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Synaptojanin 2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Synaptojanin 2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Synj2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Synaptojanin 2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Synaptojanin 2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Synj2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Synj2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.