Synaptojanin 1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-430506-ACT

Synj1 codifica a sinaptojanina 1, uma fosfatase de polifosfoinositídeos que hidrolisa PI(4,5)P2 e fosfoinositídeos relacionados para regular o tráfego de membranas. Em neurônios, a sinaptojanina 1 coordena a endocitose mediada por clatrina e a reciclagem de vesículas sinápticas ao acoplar o turnover de fosfoinositídeos à desmontagem do revestimento (coat) e à remodelação de actina. Essa atividade se cruza com a triagem endossomal e com dinâmicas de membrana relevantes para a autofagia, que moldam a função pré-sináptica e a proteostase. A atividade desregulada de SYNJ1 tem sido associada à biologia de doenças neurodegenerativas e distúrbios do movimento, tornando-o um alvo útil para estudar vias de manutenção sináptica sob estresse.

Synaptojanin 1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Synj1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Synaptojanin 1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Synj1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Synj1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Synaptojanin 1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Synj1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Synaptojanin 1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Synaptojanin 1 em células tumorais com expressão de Synj1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.