Synaptogyrin-2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404687-ACT

Il gene umano **SYNGR2** codifica la **sinaptogirina-2**, una proteina di membrana delle vescicole sinaptiche a quattro domini transmembrana (tetraspan), implicata nell’organizzazione presinaptica e nel rilascio di neurotrasmettitori dipendente dall’attività. I membri della famiglia delle sinaptogirine contribuiscono alla biogenesi, al traffico e al riciclo delle vescicole influenzandone composizione e dinamica all’interno del programma di trasmissione sinaptica. Per questi ruoli, l’espressione e la regolazione di **SYNGR2** sono rilevanti per studi su eccitabilità neuronale, plasticità sinaptica e funzione dei circuiti, con possibile pertinenza ai meccanismi di malattie neuropsichiatriche e del neurosviluppo in cui il ciclo delle vescicole e la segnalazione presinaptica risultano alterati. La misurazione di cambiamenti dipendenti da SYNGR2 nei marcatori vescicolari, nella probabilità di rilascio e nella cinetica dell’endocitosi può aiutare a collegare la regolazione genica ai fenotipi cellulari in modelli neuronali e neurosecretori.

Synaptogyrin-2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SYNGR2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Synaptogyrin-2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SYNGR2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SYNGR2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Synaptogyrin-2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SYNGR2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Synaptogyrin-2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Synaptogyrin-2 nelle cellule tumorali con espressione di SYNGR2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.