Synaptogyrin-1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423238

Panoramica

Syngr1 codifica la sinaptogirina-1, una proteina di membrana delle vescicole sinaptiche arricchita nei terminali presinaptici, che contribuisce all’organizzazione delle vescicole e a un rilascio efficiente dei neurotrasmettitori. Partecipa ai principali processi del ciclo delle vescicole sinaptiche, inclusi il traffico vescicolare, l’ancoraggio (docking) e l’endocitosi, e si interseca funzionalmente con vie che regolano l’accoppiamento eso-endocitico e la dinamica della membrana presinaptica. Nei neuroni di topo, la sinaptogirina-1 è utilizzata come marcatore e come nodo meccanicistico per studiare la trasmissione sinaptica e la plasticità sia nelle sinapsi eccitatorie sia in quelle inibitorie. Alterazioni nella gestione delle vescicole sinaptiche e nelle reti di proteine presinaptiche che coinvolgono la sinaptogirina-1 sono rilevanti per la ricerca sui meccanismi delle malattie neuroevolutive e neurodegenerative caratterizzate da disfunzione sinaptica.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Synaptogyrin-1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Syngr1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Syngr1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Syngr1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Synaptogyrin-1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Syngr1 per lo studio della segnalazione di Synaptogyrin-1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Syngr1 critici per la funzione di Synaptogyrin-1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Syngr1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Synaptogyrin-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Synaptogyrin-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Syngr1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Synaptogyrin-1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Synaptogyrin-1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Syngr1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Syngr1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.