Synapsin Ia/b Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423233

Panoramica

Syn1 codifica la sinapsina Ia/b, una fosfoproteina specifica dei neuroni che si associa alle vescicole sinaptiche e al citoscheletro di actina per regolare il raggruppamento delle vescicole, il mantenimento del pool di riserva e il rilascio di neurotrasmettitori dipendente dall’attività. La sinapsina Ia/b è modulata da cascate di fosforilazione dipendenti dal calcio e dal cAMP, collegando l’attività di scarica neuronale alla mobilizzazione delle vescicole sinaptiche e alla plasticità presinaptica. Attraverso questi processi, Syn1 contribuisce alla maturazione dei circuiti, alla stabilità delle sinapsi e alla plasticità sinaptica a breve termine che plasmano l’elaborazione delle informazioni nel sistema nervoso centrale. Alterazioni della segnalazione della sinapsina sono state implicate in fenotipi neurosviluppo e neuropsichiatrici e sono ampiamente studiate in relazione alla suscettibilità alle crisi epilettiche e alla disfunzione sinaptica.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Synapsin Ia/b (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Syn1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Syn1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Syn1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Synapsin Ia/b.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Syn1 per lo studio della segnalazione di Synapsin Ia/b, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Syn1 critici per la funzione di Synapsin Ia/b
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Syn1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Synapsin Ia/b CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Synapsin Ia/b CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Syn1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Synapsin Ia/b Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Synapsin Ia/b (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Syn1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Syn1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.