Synapsin Ia/b Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401064-ACT

SYN1 codifica la sinapsina Ia/b, una fosfoproteina arricchita nei neuroni che si associa alle vescicole sinaptiche e ai filamenti di actina per regolare il raggruppamento delle vescicole, il mantenimento del pool di riserva e il rilascio di neurotrasmettitori dipendente dall’attività. La funzione della sinapsina Ia/b è controllata dalla fosforilazione a valle di segnali Ca2+-dipendenti e delle vie cAMP/PKA e MAPK, collegando l’attività neuronale alla mobilizzazione delle vescicole presinaptiche e alla plasticità sinaptica. Grazie al suo ruolo nel modulare l’efficacia presinaptica e l’eccitabilità della rete, un’alterata regolazione di SYN1 è stata associata a fenotipi neurosviluppo e neuropsichiatrici, tra cui epilessia e disturbo dello spettro autistico, ed è spesso studiata in modelli di disfunzione sinaptica.

Synapsin Ia/b Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SYN1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Synapsin Ia/b Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SYN1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SYN1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Synapsin Ia/b. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SYN1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Synapsin Ia/b nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Synapsin Ia/b nelle cellule tumorali con espressione di SYN1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.