SWAP-70 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403465-ACT

O SWAP70 humano codifica a SWAP-70, uma proteína ligante de fosfatidilinositol e reguladora de F-actina que conecta a sinalização de membrana à remodelação do citoesqueleto. A SWAP-70 participa de processos mediados por pequenas GTPases que influenciam a formação de lamelipódios, a adesão celular e a migração dirigida, e tem sido estudada no contexto da ativação e do tráfego de células imunes. Por meio de seus papéis na dinâmica da actina e na integração de sinais, a SWAP-70 é relevante para vias que moldam a morfologia celular e programas de motilidade frequentemente investigados em inflamação e na biologia do câncer.

SWAP-70 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SWAP70 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SWAP-70 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SWAP70 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SWAP70, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SWAP-70. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SWAP70 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SWAP-70 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SWAP-70 em células tumorais com expressão de SWAP70 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.