SVEP1 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-413315-LAC

SVEP1 (sushi, fattore di von Willebrand di tipo A, EGF e dominio contenente pentraxina 1) codifica una grande proteina associata alla matrice extracellulare che sostiene l’adesione cellula–cellula e cellula–matrice e contribuisce all’organizzazione dei tessuti. SVEP1 attiva una segnalazione dipendente dalle integrine ed è collegata alla regolazione del rimodellamento vascolare e linfatico, al reclutamento di cellule infiammatorie e alle interazioni stroma–epitelio che plasmano i programmi di sviluppo e di riparazione. Un’espressione alterata di SVEP1 è stata associata a caratteristiche cardiometaboliche e vascolari, al rimodellamento fibrotico e a specifiche proprietà del microambiente tumorale, rendendolo un bersaglio utile per analizzare le reti di segnalazione guidate dalla matrice extracellulare. Studi funzionali esaminano comunemente SVEP1 in contesti endoteliali e mesenchimali per comprendere come i segnali della matrice modulino migrazione, differenziamento e crosstalk immuno-stromale.

Le particelle di attivazione lentivirale SVEP1 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di SVEP1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale SVEP1 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione SVEP1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di SVEP1. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo SVEP1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.