SUZ12 Plasmide Double Nickase (m): sc-424636-NIC

Suz12 codifica SUZ12, un componente centrale essenziale del complesso repressivo Polycomb 2 (PRC2) che coopera con EZH2/EED per depositare il marcatore istonico repressivo H3K27me3 e stabilire un silenziamento genico ereditabile. Nelle cellule di topo, SUZ12 contribuisce a regolare i programmi genici dello sviluppo, l’impegno di linea e l’architettura della cromatina controllando la repressione trascrizionale a promotori bivalenti e in altri loci bersaglio dei Polycomb. Attraverso la regolazione epigenetica dipendente da PRC2, SUZ12 influenza processi quali l’autorinnovamento delle cellule staminali, la differenziazione e il controllo del ciclo cellulare, e la sua alterazione è associata a stati trascrizionali disregolati rilevanti per la biologia dei tumori e per fenotipi dello sviluppo. Queste funzioni rendono Suz12 un nodo ampiamente utilizzato per lo studio della repressione mediata dalla cromatina, della regolazione enhancer–promoter e delle reti di espressione genica specifiche del contesto.

SUZ12 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Suz12 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Suz12. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Suz12. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Suz12 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.