Plasmide CRISPR/Cas9 KO SURF-4 (m): sc-423221

Présentation

Surf4 code pour SURF-4, un récepteur de cargaison membranaire du réticulum endoplasmique (RE) qui participe à l’export sélectif des protéines sécrétoires du RE vers l’appareil de Golgi via un trafic dépendant de COPII. SURF-4 contribue à la protéostasie en régulant la rétention dans le RE par rapport au transport antérograde, influençant ainsi l’efficacité de la sécrétion et la réponse cellulaire aux protéines mal repliées. Dans les systèmes murins, la fonction de Surf4 recoupe des voies contrôlant la gestion des lipides, l’abondance des protéines extracellulaires et la signalisation du stress du RE, ce qui la rend pertinente pour l’étude de la régulation métabolique et de l’homéostasie de la voie sécrétoire. La perturbation du trafic médié par SURF-4 est utilisée pour modéliser des mécanismes reliant des défauts de sécrétion à des dysfonctions cellulaires et à des phénotypes associés à des maladies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SURF-4 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Surf4 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Surf4, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Surf4 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SURF-4.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Surf4 pour l'étude de la signalisation de SURF-4, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Surf4 essentiels à la fonction de SURF-4
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Surf4 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le SURF-4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le SURF-4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Surf4. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le SURF-4 plasmide HDR (m) et le SURF-4 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Surf4 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Surf4 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.