SUMO-1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423588

Panoramica

Sumo1 codifica per SUMO-1, un modificatore simil-ubiquitina che viene coniugato covalentemente ai residui di lisina delle proteine bersaglio per regolarne localizzazione, stabilità e reti di interazione. La SUMOilazione influenza numerosi processi cellulari, tra cui segnalazione e riparazione del danno al DNA, organizzazione della cromatina, controllo della trascrizione, trasporto nucleare e progressione del ciclo cellulare, attraverso cascate enzimatiche coordinate E1–E2–E3 e proteasi specifiche per SUMO. La modifica con SUMO-1 spesso si interseca con il turnover dipendente dall’ubiquitina e con le vie di risposta allo stress, modellando la proteostasi e le dinamiche di segnalazione nel nucleo e nel citoplasma. Un’alterata regolazione della SUMOilazione è stata collegata a meccanismi rilevanti per la biologia del cancro, la neurodegenerazione e la regolazione immunitaria, rendendo Sumo1 un nodo utile per studi a livello di pathway in modelli murini e sistemi cellulari.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO SUMO-1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Sumo1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Sumo1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Sumo1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina SUMO-1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Sumo1 per lo studio della segnalazione di SUMO-1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Sumo1 critici per la funzione di SUMO-1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Sumo1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal SUMO-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal SUMO-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Sumo1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal SUMO-1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR SUMO-1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Sumo1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Sumo1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.