Plásmido CRISPR de Activación (h) STRAD: sc-402311-ACT

STRADA codifica STRAD, una seudocinasa catalíticamente inactiva que forma un complejo con LKB1 (STK11) y la proteína andamiaje MO25 para favorecer la localización citoplasmática y la activación de LKB1. A través de este complejo, STRAD sostiene cascadas de fosforilación que influyen en la señalización de quinasas relacionadas con AMPK, el sensado energético celular, la polaridad y el control del crecimiento, con efectos posteriores en procesos como la organización del citoesqueleto y las respuestas al estrés. La alteración o desregulación de STRADA se ha vinculado con fenotipos del neurodesarrollo y con redes de señalización desreguladas que convergen con vías estudiadas con frecuencia en la biología de la proliferación y la migración. En consecuencia, STRAD se investiga comúnmente como un nodo regulador que conecta el andamiaje de quinasas, la localización subcelular y programas transcripcionales dependientes del contexto.

STRAD El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de STRADA sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

STRAD El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus STRADA en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional STRADA, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de STRAD. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo STRADA y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de STRAD en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía STRAD en células tumorales con expresión de STRADA silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.