Plasmide CRISPR d'Activation (h) STOML2: sc-403638-ACT

STOML2 (protéine 2 de type stomatine) est une protéine associée à la membrane interne mitochondriale, impliquée dans l’organisation de microdomaines membranaires qui soutiennent la biogenèse mitochondriale et le fonctionnement de la chaîne respiratoire. Elle contribue à la protéostasie et à la dynamique mitochondriales en influençant l’assemblage de complexes protéiques et en maintenant l’intégrité des crêtes mitochondriales, ce qui la relie au métabolisme énergétique cellulaire et à l’adaptation au stress. Une expression altérée de STOML2 a été associée à des changements de la phosphorylation oxydative, de la gestion des espèces réactives de l’oxygène (ROS) et de la sensibilité à l’apoptose, des processus fréquemment étudiés en biologie du cancer et en neurodégénérescence. En tant que facteur régulateur des mitochondries, STOML2 est couramment étudiée dans des voies reliant le remodelage métabolique, le contrôle qualité mitochondrial et les signaux de survie cellulaire.

STOML2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de STOML2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

STOML2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus STOML2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription STOML2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de STOML2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus STOML2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de STOML2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie STOML2 dans les cellules tumorales présentant une expression de STOML2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.