STK33 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-404127-LAC

STK33 codifica una chinasi proteica serina/treonina implicata nella regolazione di reti di segnalazione intracellulari che coordinano la progressione del ciclo cellulare, la dinamica del citoscheletro e le risposte allo stress cellulare. In quanto chinasi, STK33 può modulare vie dipendenti dalla fosforilazione che influenzano i programmi trascrizionali e la stabilità delle proteine, collegando segnali a monte a cambiamenti a valle nella proliferazione e nella sopravvivenza. Alterazioni dell’espressione o dell’attività di STK33 sono state investigate nel contesto di dipendenze da segnali oncogenici e di un controllo aberrante della crescita in diversi modelli tumorali. Queste caratteristiche rendono STK33 un bersaglio utile per studi meccanicistici sulla segnalazione regolata dalle chinasi, sul crosstalk tra vie di segnalazione e su vulnerabilità dipendenti dal genotipo nelle cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale STK33 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di STK33 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale STK33 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione STK33, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di STK33. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo STK33 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.