STK16 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423194

Panoramica

Il gene murino **Stk16** codifica la chinasi serina/treonina 16 (STK16), una chinasi costitutivamente attiva, arricchita nel Golgi e in compartimenti associati alle membrane, che contribuisce al traffico proteico, all’organizzazione del Golgi e alla regolazione della dinamica della via secretoria. L’attività di STK16 è stata collegata al controllo dei programmi di crescita e sopravvivenza cellulare, con un crosstalk riportato con nodi di segnalazione che influenzano la proliferazione e le risposte allo stress. Modulando processi dipendenti dalla fosforilazione, STK16 può plasmare il trasporto intracellulare e fenotipi associati al ciclo cellulare, rilevanti per studi sull’omeostasi tissutale. Una segnalazione chinasi deregolata e reti di traffico alterate sono frequentemente osservate in stati cellulari associati a malattia, rendendo **Stk16** un bersaglio utile per indagini meccanicistiche sulle dipendenze di via in modelli murini.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO STK16 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Stk16 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Stk16 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Stk16 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina STK16.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Stk16 per lo studio della segnalazione di STK16, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Stk16 critici per la funzione di STK16
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Stk16 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal STK16 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal STK16 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Stk16. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal STK16 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR STK16 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Stk16 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Stk16 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.